Главная

Популярная публикация

Научная публикация

Случайная публикация

Обратная связь

ТОР 5 статей:

Методические подходы к анализу финансового состояния предприятия

Проблема периодизации русской литературы ХХ века. Краткая характеристика второй половины ХХ века

Ценовые и неценовые факторы

Характеристика шлифовальных кругов и ее маркировка

Служебные части речи. Предлог. Союз. Частицы

КАТЕГОРИИ:






Bacillus subtilis 23 22 страница




 

Завдання на виконання

I. Фізичні фактори отримання мутантів. Для проведення роботивикористовують прототрофний гаплоїдний штам дріжджів S. cerevisiae 15В-П4 (рис. 4.1). Опромінення УФ-променями проводять бактерицидною лампою БУВ-30П при інтенсивності випромінювання 20 ерг/ мм2∙с. Тривалість експозиції становить 60, 90 і 120 с (загальна доза дорівнює відповідно 1200, 1800, 2400 ерг/мм2). Відстань між джерелом УФ-променів і поверхнею чашки – не більше 35 см. Опроміненню піддають моноклітинну культуру з концентрацією 5·106 клітин/мл. Опромінення проводять у чашках діаметром 40 – 50 мм (під час опромінення кришку знімають). Оброблення опроміненої суспензії, розсів її на чашки, загортання чашок у папір слід проводити при червоному світлі, яке перешкоджає фотореактивації опромінених клітин.

 

1. Із приготовленої суспензії концентрацією 5∙106 клітин/мл (методику приготування див. у лабораторній роботі 1) відбирають 0,1 мл для контрольного висіву на чашки. При цьому розводять суспензію до концентрації 1∙104 клітин/мл внесенням 0,1 мл суспензії в 4,9 мл води (розведення І). Із розведення І 0,1 мл суспензії додають до 0,9 мл води (розведення ІІ).

 

2. На чашку з попередньо залитим середовищем повного складу вносять по 0,05 мл суспензії з кожного розведення, після чого суспензію розтирають шпателем. Потім чашки вміщують у термостат з температурою 30 °С. Контрольний висів дає можливість визначити густину висіву вихідної суспензії, частоту появи спонтанних аденинзалежних мутантів і служить контролем для порівняння з результатами опромінення клітин.

3. П е р ши й в а р і а н т. Під час опромінення суспензії клітин перенесена в чашки культура постійно перемішується легким погойдуванням (без розбризкування!). Після закінчення експозиції чашку закривають, виводять із опромінення й відбирають із суспензії пробу в кількості 0,1 мл. Переносять її у пробірку з 2,4 мл води для одержання розведення І. З розведення І відбирають



 

 

Вихідна

 

культура дріжджів,

5·106

 

кл./мл

 

 

3 мл

 

 

3 мл

 

3 мл


 

  0,1 мл                     0,1 мл  
                     
                               
                         
                        0,1 мл           0,1 мл  
                                   
                                   
                                   
                                                         
  УФ 4,9 мл води                            
                             
  0,1 мл                                      
                0,9 мл води          
                                   
                                   
                       
                                             
                          0,1 мл   0,1 мл  
                                         
                                         
                                         
                                         
                                                   
                                                   
                                                   
                                                   
          2,4 мл 0,1 мл                              
                                   
                               
                                 
                                       
  УФ води                          
                       
  0,4 мл             0,9 мл води        
                     
                   
                         
                         
                             
                              0,1 мл  
                               
                               
                               
                          0,1 мл             0,1 мл  
                                       
                                       
                                       
                                                         
                                                         
                                                         
                                                         






Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском:

vikidalka.ru - 2015-2024 год. Все права принадлежат их авторам! Нарушение авторских прав | Нарушение персональных данных