Bacillus subtilis 23 22 страница

⇐ Предыдущая 1 234 5 6 7 Следующая ⇒

Завдання на виконання

I. Фізичні фактори отримання мутантів. Для проведення роботивикористовують прототрофний гаплоїдний штам дріжджів S. cerevisiae 15В-П4 (рис. 4.1). Опромінення УФ-променями проводять бактерицидною лампою БУВ-30П при інтенсивності випромінювання 20 ерг/ мм²∙с. Тривалість експозиції становить 60, 90 і 120 с (загальна доза дорівнює відповідно 1200, 1800, 2400 ерг/мм²). Відстань між джерелом УФ-променів і поверхнею чашки – не більше 35 см. Опроміненню піддають моноклітинну культуру з концентрацією 5·10⁶ клітин/мл. Опромінення проводять у чашках діаметром 40 – 50 мм (під час опромінення кришку знімають). Оброблення опроміненої суспензії, розсів її на чашки, загортання чашок у папір слід проводити при червоному світлі, яке перешкоджає фотореактивації опромінених клітин.

1. Із приготовленої суспензії концентрацією 5∙10⁶ клітин/мл (методику приготування див. у лабораторній роботі 1) відбирають 0,1 мл для контрольного висіву на чашки. При цьому розводять суспензію до концентрації 1∙10⁴ клітин/мл внесенням 0,1 мл суспензії в 4,9 мл води (розведення І). Із розведення І 0,1 мл суспензії додають до 0,9 мл води (розведення ІІ).

2. На чашку з попередньо залитим середовищем повного складу вносять по 0,05 мл суспензії з кожного розведення, після чого суспензію розтирають шпателем. Потім чашки вміщують у термостат з температурою 30 °С. Контрольний висів дає можливість визначити густину висіву вихідної суспензії, частоту появи спонтанних аденинзалежних мутантів і служить контролем для порівняння з результатами опромінення клітин.

3. П е р ши й в а р і а н т. Під час опромінення суспензії клітин перенесена в чашки культура постійно перемішується легким погойдуванням (без розбризкування!). Після закінчення експозиції чашку закривають, виводять із опромінення й відбирають із суспензії пробу в кількості 0,1 мл. Переносять її у пробірку з 2,4 мл води для одержання розведення І. З розведення І відбирають