Подготовка к анализу

Приготовление рабочего реагента: развести необходимое количество реагента №1 бидистиллированной или деионизованной водой в 5раз (1часть реагента №1+4 части воды).

Стабильность рабочего реагента: не менее 6 месяцев при температуре 18-25⁰С, в темном месте, в плотно закрытой посуде. Не используйте рабочий реагент, если его оптическая плотность против воды более 0,2(кювета-1см,длина волны 540нм).

Калибратор:готов к использованию.

Необходимо выполнять калибровку для каждой серии реагентов, при изготовлении нового рабочего реагента и при длительном хранении приготовленного рабочего реагента.

Исследуемый материал (образец)

Свежая сыворотка или плазма (гепарин или ЭДТА) без следов гемолиза. Отделить от эритроцитов в течение часа. Образец стабилен 1месяц при -20⁰С или 3дня при 2-8⁰С.

Для анализа не следует использовать гемолизированные или хилезные образцы.

Проведение анализа

Длина волны: 540нм (520-560)нм.

Длина оптического пути: 1см (5мм).

Температура инкубации: комнатная (18-25⁰С) или 37⁰С

Фотометрирование: против холостой пробы.

Пробы тщательно перемещать, инкубировать 30мин при 18-25⁰С и измерить оптическую плотность опытной (Е_оn) и калибровочной (Е_к) проб против холостой пробы.

Окраска стабильна не менее 30минут после окончания инкубации при предохранении от прямого солнечного света.

Расчеты

Концентрацию общего белка (С) в образце определить по формуле:

С = Е_оn/Е_к х 70

Где: Е_оn – оптическая плотность опытной пробы, ед. опт. плот.

Е_{к –} оптическая плотность калибратора, ед. опт. плот.

70г/л – концентрация общего белка в калибраторе.

Примечение: Если концентрация общего белка в образце превышает 120г/л, следует разбавить его физ. раствором, повторить анализ, результат умножить на фактор разведения.

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском: