Гидролиз крахмала под действием амилазы слюны

Ферменты амилазы (класс гидролаз, подкласс гликозидаз) осуществляют гидролиз a - 1,4- гликозидазных связей в полисахаридах (крахмал, гликоген и др.) и олигосахаридах с образованием в качестве конечных продуктов мальтозы или глюкозы. При гидролизе крахмала под действием амилаз в качестве промежуточных продуктов распада возникают декстрины различной длины.

Постепенное дробление молекулы крахмала под действием амилаз можно проследить по изменению цвета крахмала с йодом. Крахмал дает с йодом синее окрашивание, растворимый крахмал – сине-фиолетовое, амилодекстрины – фиолетовое, эритродекстрины – красно-бурый цвет, мальтоза и глюкоза не изменяют окраски йода.

Материалы, реактивы, оборудование. 1%-ный раствор крахмала, раствор слюны, 1%-ный раствор йода в йодистом калии, реактив Фелинга, термостат или водяная баня (Т=40°С), пробирки, пипетки, капилляры, стеклянные палочки.

Ход работы. Приготовление разбавленной слюны. Ополаскивают полость рта, чтобы удалить остатки пищи. 1мл слюны разводят в 5-10 раз дистиллированной водой, встряхивают в течение минуты, фильтруют, употребляют для работы.

В колбу наливают 20 мл дистиллированной воды и прибавляют несколько капель раствора йода в йодистом калии. Полученную смесь разливают в 10 пробирок по 2 мл.

В пробирку наливают 5 мл 1% раствора крахмала и приливают 1 мл фермента (разбавленная, профильтрованная слюна), помещают в термостат при температуре 40°С. Через 30 секунд отливают 0,5 мл пробы в пробирку с раствором йода. Эту процедуру повторяют с интервалом в 30 секунд, пока раствор йода в очередной пробирке не будет изменять свою окраску при добавлении пробы, что свидетельствует об окончании гидролиза. После этого к объему пробы, оставшемуся в пробирке, добавить 1/2 объема реактива Фелинга. Пробирку нагревают в пламени спиртовки до кипения. Образуется красный осадок оксида меди, что свидетельствует о наличии в смеси продуктов гидролиза крахмала: глюкозы, мальтозы, обладающих восстанавливающей способностью.

Лабораторная работа 6

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском: