Специфичность действия амилазы и сахаразы

Материалы, реактивы, оборудование. 1%-ный раствор крахмала, раствор разбавленной и отфильтрованной слюны, 1%-ный раствор сахарозы, раствор сахаразы (дрожжевой экстракт), раствор йода в йодистом калии, пробирки, пипетки, термостат или водяная баня (Т=40°С).

Ход работы. Нумеруют 4 пробирки. В 1 и 2 пробирку наливают по 2 мл раствора крахмала, в 3 и 4 пробирки – по 2 мл раствора сахарозы.

Затем в 1 и 3 пробирки добавляют по 1 мл разбавленной слюны, а во 2 и 4 пробирки – по 1 мл раствора сахаразы. Перемешивают содержимое пробирок и ставят на 10-15 мин в термостат при температуре 40°С. В пробирках с крахмалом (1 и 2) проводят пробу с раствором йода, в пробирках с сахарозой (3 и 4) реакцию с реактивом Фелинга.

Лабораторная работа 7

Влияние температуры на активность амилазы слюны

Скорость ферментативных реакций, как и большинства химических процессов, увеличивается при нагревании. Однако, в отличие от неферментативных реакций, это увеличение скорости в случае ферментов наблюдается в сравнительно узком температурном интервале. По достижении некоторой температуры, характерной для каждого фермента, скорость реакции достигает максимального значения, после чего с повышением температуры падает. Температура, соответствующая максимальной скорости, называется оптимальной (Топт). Для большинства ферментов теплокровных животных, такой оптимальной температурой является 37-400C. Уменьшение скорости ферментативной реакции при температурах, более высоких, чем оптимальная, объясняется термолабильностью ферментов, т.е. чувствительностью к действию высокой температуры. Как правило, ферментативные процессы не могут протекать при температуре выше 700С. Степень инактивации фермента зависит не только от температуры, но и от длительности теплового воздействия. Уменьшение скорости ферментативной реакции при повышении температуры объясняется неспецифической тепловой денатурацией белковой молекулы фермента и потерей вследствие этого каталитической активности. При более низких температурах скорость ферментативного катализа замедляется, падая при 00С до очень малой величины.

Материалы, реактивы, оборудование. 1%-ый раствор крахмала; слюна, фильтрованная и разбавленная (1:10); раствор иода в иодистом калии; 10% раствор едкого натра; 1% раствор меди сернокислой; водяная баня; пипетки на 1 и 2 мл; стеклянные палочки; фарфоровая пластинка.

Ход работы. В 4-е пронумерованные пробирки наливают по 2 мл 1% раствора крахмала. Пробирку 1 помещают в кипящую водяную баню; пробирку 2 - в баню при 40⁰С; пробирку 3 оставляют на рабочем столе (при комнатной температуре); пробирку 4 помещают в лед. В течение 10 минут содержимое пробирок принимает температуру окружающей среды. Затем во все пробирки добавляют по 0,5 мл слюны (разбавленной в 10 раз), перемешивают и оставляют в тех же условиях. Наблюдение за ходом гидролиза осуществляют с помощью иодной реакции, для этого в каждой из четырех пробирок через определенный интервал (20-30 секунд) берут по несколько капель смеси и переносят их в пробирки с раствором иода, приготовленными заранее. По изменению окраски крахмала с иодом судят о степени гидролиза. Результаты заносят в таблицу:

В заключение следует сделать выводы: а) об оптимальной температуре для действия фермента; б) об изменении активности фермента в результате кипячения его раствора.

Лабораторная работа 8

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском: