Действие активаторов и ингибиторов на ферменты

Помимо температуры и рН, большое влияние на активность ферментов оказывает присутствие в растворе ряда химических соединений. Одни из таких соединений повышают активность ферментов (активаторы), другие, напротив, действуют на них угнетающим образом (ингибиторы или парализаторы). В качестве активатора амилазы слюны используют 1% раствор хлористого натрия. В качестве парализатора – 1% раствор сернокислой меди.

Материалы, реактивы, оборудование. Слюна профильтрованная; 1% раствор крахмала, 1% раствор поваренной соли, 1% раствор сернокислой меди, раствор йода в йодистом калии; пробирки, пипетки на 2 мл и 1 мл, водяная баня, термометр на 100º С.

Ход работы. В три пробирки помещают по 1 мл следующих растворов: в первую – дистиллированную воду, во вторую – 1% раствор хлористого натрия, в третью – 1% раствор сернокислой меди. Во все пробирки наливают по 2 мл 1% раствора крахмала и по 1 мл раствора слюны, разбавленной в 10 раз, содержимое пробирок перемешивают. Все три пробирки быстро и одновременно помещают в водяную баню при 40°С.

Наблюдение за ходом гидролиза осуществляют с помощью реакции с иодом, для этого в каждой из трех пробирок через определенный интервал (20-30 секунд) берут по несколько капель смеси и переносят их в пробирки с раствором иода, приготовленными заранее. При отсутствии заметного различия проб в окраске с йодом продолжают нагревание пробирок в водяной бане еще несколько минут (1 - 5 минут), а затем вновь испытывают пробы на степень расщепления крахмала. Если наблюдается различие по окраске с иодом в испытуемых пробах, то пробирки вынимают из бани, охлаждают и добавляют в каждую пробирку 3-4 капли раствора йода. По окраске с йодом определяют степень расщепления крахмала амилазой слюны.

Наилучшее переваривание крахмала наблюдается в присутствии хлористого натрия. В присутствии ионов меди переваривание крахмала сильно заторможено или полностью отсутствует.

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском: