Скрининг гибридных клеток, продуцирующих антиидиотипические антитела

В целях оценки стабильности антительной продуктивности, гибридомы были подвергнуты пятикратному пассажированию, в течение которых исследовали их культуральную жидкость в ИФА на наличие антиидиотипических антител против моноклональных антител специфических к полипептидному антигену р24 вируса лейкоза крупного рогатого скота (таблица 6). Тестирование проводили с интервалом в три-четыре дня, начиная с седьмого дня культивирования. В качестве отрицательного контроля применялась культуральная жидкость материнских миеломных клеток.

Таблица 6 – Результаты тестирования культуральной жидкости гибридом в ИФА

Как видно из таблицы 6, результаты тестирования культуральной жидкости указывают на высокий выход положительных клонов – до 83,3%. Таким образом, во второй гибридизации мы получили не только высокой выход, но и достаточно высокий процент положительных клонов, сохраняющих свою специфическую антителообразующую активность после нескольких пассажей. Из позитивных клонов гибридом в течение 5 пассажей с интервалом в 3-4 дня не утратили своих свойств 2 гибридомы, обозначеные нами, как: 1F2, 2G8. Титры АИТА штаммов этих гибридом против МКА составили в культуральной жидкости от 1:200 до 1:6400. Среди них наиболее перспективным представляется штамм гибридных клеток 1F2, имеющим более высокие значения ОП (до 2,367).

В дальнейшем нами были изучены морфологические и культуральные свойства гибридомы 1F2 в условиях in vitro.

Результаты исследований показали, что гибридный штамм 1F2 хорошо растет в ростовой среде, представляющей собой RPMI-1640 с 10% сывороткой плода коровы, 2×10^-3 МL -глютамина, 1×10^{-3 М} пирувата натрия при температуре 37,5^оС в атмосфере с 5% СО₂.

Характер роста гибридом – стационарная суспензия. При посеве в матрацы гибридомы представляют собой слабо прикрепляющиеся к подложке округлые клетки с исходную миеломную, цитоплазма гибридом имеет вид тонкого ободка вокруг ядра (рисунок 7).

Рисунок 7 – Рост гибридных клеток 1F2 в культуре

На 4-5 день культивирования гибридом в условиях in vitro концентрация моноклональных антител достигала 4-5 мкг/мл в 1 мл ростовой среды.

В результате проведенной работы были получены клоны гибридных клеток, продуцирующие антиидиотипические антитела, несущие в себе образ эпитопа полипептида р24 вируса лейкоза крупного рогатого скота. Получение штаммов, устойчиво продуцирующих антиидиотипы данной специфичности, что позволит обеспечить наработку дешевого, стандартного антигенного препарата для производства иммунологических тестов, используемых в серологической диагностике лейкоза крупного рогатого скота.

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском: