Лабораторная работа № 5.Определение изоэлектрической точки желатина

Белковые молекулы обладают самыми разнообразными радикалами, часть из которых способна ионизироваться. В результате в местах расположения свободных аминогрупп в белковой молекуле возникают радикалы, заряженные положительно, а в точках локализации карбоксильных групп – отрицательно. В зависимости от их соотношения молекула белка в целом приобретает суммарный положительный или отрицательный заряд.

Число ионизированных групп в белке может быть увеличено или уменьшено при изменении рН среды. В кислой среде (при избытке ионов водорода) диссоциация карбоксильных групп подавляется и суммарный отрицательный заряд белковой молекулы падает. В щелочной среде сокращается ионизация катионных групп и суммарный положительный заряд белка уменьшается. Значение рН среды, при котором молекула белка электронейтральна и полностью утрачивает способность мигрировать к аноду или катоду, называется изоэлектрической точкой белка (ИЭТ). Растворы белков обладают в изоэлектрической точке минимальной стабильностью. Для некоторых белков минимальная устойчивость их растворов проявляется в том, что они самопроизвольно коагулируют (выпадают в осадок) в ИЭТ; другие белки в этой точке наиболее легко коагулируют при добавлении какого-либо осадителя. Испытывая поведение белков при различных концентрациях водородных ионов в растворах, легко найти значение рН среды, соответствующее ИЭТ белка.

Материалы, реактивы, оборудование. 1% раствор желатины; 0,1 н раствор уксусной кислоты; 1 н раствор уксусной кислоты; дистиллированная вода; 0,1 н раствор уксуснокислого натрия; спирт; пробирки; пипетки; штативы.

Ход работы. Готовят серию из 6 пробирок, поочередно приливая указанные в таблице реактивы. Взбалтывают содержимое пробирок. Прибавляют из пипетки медленно, при помешивании, в пробирку №4 столько спирта, чтобы спустя некоторое время появилась едва заметная муть, обычно для этого требуется 8 мл. Во все другие пробирки прибавляют при помешивании столько спирта, сколько в пробирку №4. После 30-минутного стояния отмечают пробирку с максимальным помутнением и, таким образом, находят значение рН среды, отвечающее изоэлектрической точке желатины. Отмечают его в нижней строке таблицы.

Вопросы к семинару по модулю № 2.

Аминокислоты и пептиды – строение, свойства, биологическая роль.

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском: