Ортотолуидиновый метод определения глюкозы

Глюкоза при нагревании с ортотолуидином в растворе уксусной кислоты дает сине-зеленое окрашивание, интенсивность которого прямо пропорциональна концентрации глюкозы и определяется на фотоэлектроколориметре.

С ортотолуидиновым реактивом реагируют все альдогексозы, но их содержание в крови невелико, поэтому метод позволяет определить практически одну глюкозу.

Материалы, реактивы, оборудование. 3% раствор трихлоруксусной кислоты; ортотолуидиновый реактив; стандартный раствор глюкозы, 1 г/л (100 мг % раствор); центрифуга; центрифужные пробирки; микропипетка вместимостью 0,1 мл.; пипетки вместимостью 1 мл; ФЭК; кровь или сыворотка крови.

Ход работы.

В две центрифужные пробирки наливают по 0,9 мл 3% раствора трихлоруксусной кислоты, затем в одну из них вносят 0,1 мл крови, взятой из пальца (или сыворотки крови), а в другую – 0,1 мл стандартного раствора глюкозы. Содержание пробирок перемешивают и центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10 минут. Для определения берут по 0,5 мл надосадочной жидкости из каждой пробирки, вносят в обычные сухие пробирки, добавляют по 4,5 мл ортотолуидинового реактива и помещают пробирки в кипящую водяную баню на 8 мин. Необходимо следить, чтобы вода в бане непрерывно кипела. Вынимают пробирки и охлаждают их водопроводной водой до комнатной температуры. Затем измеряют на фотоэлектроколориметре оптическую плотность проб в кюветах на 10 мм против воды с красным светофильтром (620 нм); поскольку контроль на реактивы на ФЭК равен нулю, окраска ортотолуидинового реактива не развивается.

Расчет.

Концентрацию глюкозы в крови можно рассчитать по готовой калибровочной кривой, где по вертикали находят величину экстинкции для опытной пробы, а по горизонтали – концентрацию глюкозы в исследуемой крови, выраженную в ммоль/л (мг%).

Нормальное содержание глюкозы в сыворотке крови человека, определяемое ортотолуидиновым методом, колеблется в пределах 3,33 – 4,99 ммоль/л (60 – 90 мг%).

Лабораторная работа 3.

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском: