Влияние желчи на активность липазы

Липаза – малоспецифический фермент, который действует на многие жиры при рН 9,0. Липаза гидролитически расщепляет пищевые жиры и в первую очередь эфирную связь в α-положении (т. е. в крайнем положении). Скорость действия липазы в отдельных порциях жира молока можно узнать по количеству жирных кислот, образующихся при гидролизе жира за определенный промежуток времени. Количество жирных кислот определяют титрованием щелочью в присутствии фенолфталеина. В случае добавления в пробирку желчи липаза активируется и гидролиз жиров молока протекает с большей скоростью. Результаты определения выражают в миллилитрах титрованного раствора щелочи, и строят график, где на оси ординат откладывают количество 0,05 н. раствора щелочи, пошедшей на нейтрализацию жирных кислот, в миллилитрах, а на оси абсцисс – время в минутах.

Материалы, реактивы, оборудование. 5% растворпанкреатина (или вытяжка из поджелудочной железы, содержащая липазу), (готовят каждые 2 дня, хранят в холодильнике); 0,5% спиртовой раствор фенолфталеина; 0,05 н. раствор едкого натра; молоко, прокипяченное и предварительно разведенное дистиллированной водой 1:1; термостат;микробюретки; пипетки вместимостью 1,2 и 10 мл.

Ход работы.

В два стакана или колбы наливают по 10 мл молока и по 1 мл 5% раствора панкреатина. В один стакан приливают 1 мл воды, а в другой – 1 мл желчи. Жидкость в стаканах быстро перемешивают. Из каждого стакана отбирают по 1 мл смеси в колбу, добавляют 1-2 капли 0,5% раствора фенолфталеина и сразу титруют 0,05 н. раствором едкого натра до слабо-розовой окраски, неисчезающей в течение 30 с. Затем оба стакана с оставшейся смесью помещают в термостат при 38˚С. Через каждые 10 мин из стакана отбирают по 1 мл смеси и титруют 0,05 н. раствором едкого натра в присутствии фенолфталеина до слабо-розовой окраски. Проводят 5-6 таких определений и на основании полученных данных строят две кривые, отражающие процесс гидролиза жира под действием фермента липазы во времени и в зависимости от наличия или отсутствия желчи.