Определение количества мочевины в моче уреазным способом

Аммиак, образуется при дезаминировании аминокислот, при дезаминировании пуринов и при других реакциях обмена АК и биогенных аминов у млекопитающих (включая человека) в норме почти весь превращается в мочевину, которая выделяется с мочой как конечный продукт белкового обмена. Синтез мочевины в организме млекопитающих происходит в печени. Мочевина составляет главную часть экскретируемого с мочой азота. Азот мочевины у человека составляет около 85% общего азота мочи и даже при бедной белками пище не опускается ниже 65%.

Содержание мочевины в крови составляет около 0,03%, в моче - около 2%. Высокая концентрация мочевины в моче достигается в результате сложного процесса ультрафильтрации и обратного всасывания, происходящих в почках. Суточное выведение мочевины у человека составляет около 25 г.

Материалы, реактивы, оборудование. Раствор мочевины или разведенная в 10 раз моча; фосфатный буфер (рН=7,0), индикатор – метиловый оранжевый, 0,1 н. раствор соляной кислоты, пипетки, колбы на 100 мл, термостат, электроплита, спиртовка.

Ход работы. В 2 колбы на 100 мл вносят по 5 мл раствора уреазы. Одну из них, контрольную, нагревают до кипения и кипятят 5 мин. Затем в обе колбы наливают по 5 мл фосфатного буфера рН = 7,0 и по 5 мл разведенной в 10 раз мочи.

Колбы ставят в термостат при 37⁰ на 40 мин. В обе колбы приливают по 3 капли индикатора метилового оранжевого и титруют 0,1 раствором HCl до появления оранжевого окрашивания.

1 мл соляной кислоты соответствует 3 мг мочевины.

Количество мочевины, выделяемое организмом за сутки, рассчитываются по формуле:

^{(А - В) х 3 х 1500}

^{С = -----------------------------}

^0,5

А- количество 0,1 Н раствора соляной кислоты, затраченное на титрование пробы.

В- количество 0,1 Н раствора соляной кислоты, затраченное на титрование контроля.

0,5 мл - количество мочи взятое в пробу.

1500 мл - количество мочи, выделяемое за сутки организмом.

Лабораторная работа 2.

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском: