Определение молочной кислоты в мышцах

Анаэробный распад углеводов в тканях животных и человека завершается образованием молочной кислоты. Этот процесс сопровождается образованием энергии и называется гликолизом. Особенно велика интенсивность гликолиза в мышцах при физических нагрузках.

В присутствии молочной кислоты комплексный фенолят железа фиолетового цвета превращается в молочнокислое железо желтовато-зеленого цвета.

Материалы, реактивы, оборудование. 1% FeСl₃, мышечная ткань, ступка, фильтр, марля, водяная баня, 1% фенол.

Ход работы.

1. Приготовление вытяжки мышечной ткани.

2-3 г мышечной ткани растирают с 5-7 мл воды. Фильтруют через двойной слой марли. Фильтрат кипятят 1 мин охлаждают, фильтруют через складчатый фильтр.

2. Проба с реактивом Уффельмана.

В 2 пробирки наливают по 5 мл 1% раствора фенола и по каплям 1% раствор FeСl₃ до появления интенсивного фиолетового окрашивания. Затем в одну пробирку приливают1 мл вытяжки из мышечной ткани, а в другую – 1 мл Н₂О. Содержимое пробирок перемешивают.

В пробирке, содержащей молочную кислоту фиолетовый цвет переходит в зеленовато-желтый.

Лабораторная работа 4.

Проба на брожение

Спиртовое брожение характерно для дрожжей и некоторых микроорганизмов. Под действием ферментов дрожжей глюкоза распадается на винный спирт и углекислый газ. Процесс протекает в несколько ферментативных реакций в анаэробных условиях. Суммарное уравнение процесса спиртового брожения:

С₆Н₁₂О₆ = 2С₂ Н₅ОН + 2 СО₂ + 2 АТФ + тепло

Для пробы используют бродильные трубочки. Образующийся в результате брожения СО₂ накапливается в трубке и узнается по поглощению щелочью. Присутствие С₂Н₅ОН обнаруживается с помощью реакции получения йодоформа:

С₂ Н₅ОН + 4I₂ +6 NaOH = CH₃ I + 5 NaI + HCOONa +5H₂O

Материалы, реактивы, оборудование. Дрожжи, 5% растворы глюкозы и сахарозы, 10% раствор едкого натра, раствор иода; фарфоровая ступка с пестиком, бродильные трубки, химические стаканы и цилиндры на 50 – 100 мл.

Ход работы.

1 г дрожжей растирают в ступке с 5 мл дистиллированной воды, полученную массу смывают в стакан 30 мл дистиллированной воды.

Тщательно перемешивают и добавляют 1 мл виннокаменной кислоты.

Наливают содержимое стакана в трубку (закрытое колено должно быть заполнено, а широкая часть должна быть заполнена наполовину) Эта трубка служит контролем.

1г дрожжей растирают в ступке с 5 мл 5% раствора глюкозы, полученную массу смывают в стакан 30 мл того же раствора глюкозы.

Наливают описанным выше способом содержимое в трубку.

Ставят обе трубки в термостат при Т 30-35⁰С на 1-2 часа.

Вынимают обе трубки, наблюдают отсутствие газа в закрытом колене первой трубки и накопление газа во второй.

В широкую часть второй трубки наливают до края 10% раствор NaOH, закрывают отверстие большим пальцем и перемешивают. СО₂ поглощается щелочью, образуется вакуум (присасывает палец).

Для обнаружения спирта из трубки №2 отфильтровывают 3-4 мл жидкости, к фильтрату добавляют несколько капель раствора йода до появления желтого окрашивания и слегка подогревают. Через некоторое время ощущается запах йодоформа.

Вопросы к семинару по модулю «Углеводы. Обмен углеводов»

1. Общая характеристика углеводов и их классификация.

2. Простые углеводы: изомерия, конформация, физические и химические свойства. Важнейшие представители: глицериновый альдегид, диоксиацетон, рибоза, дезоксирибоза, глюкоза, галактоза, манноза, фруктоза.

3. Дисахариды: восстанавливающие и невосстанавливающие дисахариды, свойства, представители: сахароза, мальтоза, лактоза.

4. Полисахариды: химическая структура, свойства, представители: крахмал, гликоген, клетчатка, (хитин, гиалуроновая кислота, гепарин).

5. Превращение углеводов в желудочно-кишечном тракте.

6. Всасывание углеводов в тонком кишечнике. Взаимопревращение моносахаридов в кишечнике.

7. Роль печени в углеводном обмене.

8. Гидролиз крахмала, ферменты гидролиза.

9. Фосфоролиз гликогена.

10. Дихотомический и апотомический пути распада глюкозы, и их соотношение.

11. Этапы биологического окисления глюкозы в клетке.

12. Гликолиз. Локализация процесса в клетке. Две стадии гликолиза. Подготовительная стадия: ферменты, участвующие в последовательных реакциях подготовительной стадии.

Вторая стадия гликолиза - реакции, приводящие к синтезу АТФ. Значение гликолиза.

13.Молочнокислое брожение у микроорганизмов.

14.Спиртовое брожение. Суммарное уравнение. Общие реакции спиртового брожения и гликолиза. Анаэробное декарбоксилирование пировиноградной кислоты. Образование конечного продукта спиртового брожения. Характеристика алкогольдегидрогеназы. Значение спиртового брожения.

15.Аэробное окисление углеводов (дыхание).

16. Пути превращения пировиноградной кислоты.

17.Механизм образования ацетил – КоА из пировиноградной кислоты. Состав и строение пируватдегидрогеназного комплекса.

18.Пентозофосфатный путь окисления глюкозы и его биологическое значение.

19.Цикл лимонной кислоты. Локализация в клетке. Биологическое значение.

20.Энергетический баланс полного окисления молекулы глюкозы.

21.Глюконеогенез. Локализация в клетке. Биологическое значение.

22.Биосинтез гликогена. Роль УТФ в синтезе углеводов.

23.Строение и механизм действия гормонов, регулирующих углеводный обмен (адреналин, глюкагон, инсулин).

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском: