Осаждение белков сернокислым аммонием

Приборы. Штатив с пробирками. Воронка с фильтром.

Реактив. Сыворотка крови или раствор яичного белка (от трех куриных яиц), который готовят смешиванием белков с 700 мл дистиллированной воды и 300 мл насыщенного раствора хлорида натрия с последующим фильтрованием через несколько слоев марли. Сернокислый аммоний (насыщенный раствор). Сернокислый аммоний в виде тонко измельченных кристаллов. Едкий натр, 10%-ный раствор. Сернокислая медь, 1%-ный раствор.

Ход работы. В пробирку наливают 5 мл сыворотки крови или разбавленного яичного белка, прибавляют равный объем насыщенного раствора сернокислого аммония и взбалтывают. В осадок выпадают белки – глобулины.

Через 5-7 мин отфильтровывают содержимое пробирок. В фильтрате остаются альбумины, а на фильтре – глобулины.

Для осаждения альбуминов в фильтрат добавляют кристаллический сернокислый аммоний до полного насыщения, т.е. пока порошок останется нерастворенным. В осадок выпадают альбумины, которые отфильтровывают.

С 1 мл фильтрата проводят биуретовую реакцию. Отрицательная реакция указывает на отсутствие белков в фильтрате и полноту осаждения.

Осадок альбуминов вместе с фильтром переносят в пробирку и растворяют в 4 мл воды, взбалтывая пробирку. Раствор альбуминов отфильтровывают и проводят с ним биуретовую реакцию.

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском: